Тэсты выяўлення антыгена малярыі
Тэсты на выяўленне антыгена малярыі — гэта група даступных у продажы экспрэс-дыягностычных тэстаў тыпу экспрэс-антыгенаў, якія дазваляюць хутка дыягнаставаць малярыю людзям, якія не валодаюць традыцыйнымі лабараторнымі метадамі дыягностыкі малярыі або ў сітуацыях, калі такое абсталяванне адсутнічае.
У цяперашні час у продажы ёсць больш за 20 такіх тэстаў (тэставанне прадуктаў СААЗ 2008 г.). Першым антыгенам малярыі, прыдатным у якасці мішэні для такога тэсту, быў растваральны глікалітычны фермент глутаматдэгідрагеназа. У цяперашні час ні адзін з экспрэс-тэстаў не з’яўляецца настолькі адчувальным, як тоўстая плёнка крыві, і не такі танны.[1][2][3] Сур’ёзным недахопам у выкарыстанні ўсіх сучасных метадаў штангі з’яўляецца тое, што вынік па сутнасці якасны. Аднак у многіх эндэмічных раёнах трапічнай Афрыкі колькасная ацэнка паразітэміі важная, паколькі вялікі працэнт насельніцтва будзе станоўчым у любым якасным аналізе.
Экспрэс-дыягностыка малярыі на аснове антыгенаў правіць
Малярыя — вылечная хвароба, калі ў пацыентаў ёсць магчымасць ранняй дыягностыкі і хуткага лячэння. Экспрэс-дыягнастычныя тэсты на аснове антыгенаў (РДТ) гуляюць важную ролю на перыферыі магчымасцяў медыцынскіх службаў, паколькі многія сельскія клінікі не маюць магчымасці дыягнаставаць малярыю на месцы з-за адсутнасці мікраскопаў і падрыхтаваных спецыялістаў для ацэнкі плёнак крыві. Акрамя таго, у рэгіёнах, дзе хвароба не эндэмічная, лабараторныя спецыялісты маюць вельмі абмежаваны вопыт у выяўленні і ідэнтыфікацыі паразітаў малярыі. Усё большая колькасць падарожнікаў з раёнаў з умераным кліматам штогод наведвае трапічныя краіны, і многія з іх вяртаюцца з інфекцыяй малярыі. Тэсты RDT па-ранейшаму разглядаюцца як дадатак да звычайнай мікраскапіі, але з некаторымі паляпшэннямі яны цалкам могуць замяніць мікраскоп. Выпрабаванні простыя, і працэдуру можна праводзіць на месцы ў палявых умовах. У гэтых аналізах выкарыстоўваецца адбітак пальцаў або вянозная кроў, яны займаюць 15-20 хвілін, а правядзенне лабараторных даследаванняў не патрабуецца. Парог выяўлення з дапамогай гэтых экспрэс-дыягнастычных тэстаў знаходзіцца ў межах 100 паразітаў/мкл крыві ў параўнанні з 5 пры тоўстаплёнкавай мікраскапіі.
pGluDH правіць
Глутаматдэгідрагеназа плазмодыя (pGluDH), вылучаная антыцеламі гаспадара Дакладны дыягназ становіцца ўсё больш важным з улікам павелічэння рэзістэнтнасці да Plasmodium falciparum і дарагоўлі альтэрнатыў хларахіну. Фермент pGluDH не сустракаецца ў чырвоных крывяных цельцах гаспадара і быў рэкамендаваны ў якасці маркернага фермента для відаў плазмодыю Пікардам-Маўра і інш. у 1975 г. Тэст на фермент маркер малярыі падыходзіць для звычайнай працы і цяпер з’яўляецца стандартным тэстам у большасці ведамстваў, якія займаюцца малярыяй. Вядома, што наяўнасць pGluDH уяўляе жыццяздольнасць паразітаў, і хуткі дыягнастычны тэст з выкарыстаннем pGluDH у якасці антыгена валодае здольнасцю дыферэнцаваць жывыя ад мёртвых арганізмаў. Поўны РДТ з антыгенам pGluDH быў распрацаваны ў Кітаі і зараз праходзіць клінічныя выпрабаванні. GluDH-гэта паўсюдныя ферменты, якія займаюць важнае месца ў галіны паміж метабалізмам вугляроду і азоту. У плазмедыі прысутнічаюць ферменты GluDH [EC 1.4.1.4], залежныя ад нікацінаміду адэніну дынуклеатыду (НАД) [EC 1.4.1.2], і залежныя ад нікацінаміду аденіну дынуклеатыду фасфату (НАДФ); NAD-залежны GluDH адносна нестабільны і непрыдатны для дыягнастычных мэтаў. Глутаматдэгідрагеназа забяспечвае акісляльны крыніца вугляроду, які выкарыстоўваецца для вытворчасці энергіі, а таксама адноўлены носьбіт электронаў, NADH. Глутамат з’яўляецца асноўным аматарам-донарам іншых амінакіслот у наступных рэакцыях трансамінавання. Множныя ролі глутамата ў азотным балансе робяць яго шлюзам паміж вольным аміякам і амінагрупамі большасці амінакіслот. Публікуецца яго крыштальная структура. Актыўнасць GluDH у P.vivax, P.ovale і P. malariae ніколі не правяралася, але, улічваючы важнасць GluDH як фермента кропкавага разгалінавання, кожная клетка павінна мець высокую канцэнтрацыю GluDH. Добра вядома, што ферменты з высокай малекулярнай масай (напрыклад, GluDH) маюць мноства изоферментов, што дазваляе дыферэнцаваць штамы (з улікам правага моноклонального антыцела). Гаспадар вырабляе антыцелы супраць паразітарнага фермента, што паказвае на ідэнтычнасць нізкай паслядоўнасці.
Бялок II, багаты гістыдынам, правіць
Багаты гістыдынам бялок II (HRP II)-багаты гістыдынам і аланінам, водарастваральны бялок, які лакалізуецца ў некалькіх аддзелах клетак, уключаючы цытаплазму паразітаў. Антыген экспрессируется толькі трофазоітамі P. falciparum. HRP II з P. falciparum ўдзельнічае ў біякрышталізацыі гемазоіну, інертнай, крышталічнай формы ферыпратапорфірыну IX (Fe (3+)-PPIX), які выпрацоўваецца паразітам. Значная колькасць HRP II вылучаецца паразітам у кроў гаспадара, і антыген можа быць выяўлены ў эрытрацытах, сыроватцы крыві, плазме крыві, спіннамазгавой вадкасці і нават у мачы ў выглядзе сакрэтуе водарастваральнага бялку. Гэтыя антыгены захоўваюцца ў цыркулявалай крыві пасля таго, як паразітэмія ачысцілася або была значна зніжана. Звычайна патрабуецца каля двух тыдняў пасля паспяховага лячэння, каб аналізы на аснове HRP2 ператварыліся ў адмоўныя, але можа спатрэбіцца і месяц, што ставіць пад пагрозу іх значэнне ў выяўленні актыўнай інфекцыі. У пацыентаў з рэўматоідным фактарам станоўчага рэўматоіднага артрыту паведамлялася аб ілжыва станоўчых выніках памочнікаў. Паколькі HRP-2 выяўляецца толькі P. falciparum, гэтыя аналізы дадуць адмоўныя вынікі з узорамі, якія змяшчаюць толькі P. vivax, P. ovale або P. malariae; таму многія выпадкі малярыі без фальципарума могуць быць няправільна дыягнаставаны як малярыйныя адмоўныя (некаторыя штамы P.falciparum таксама не маюць HRP II). Зменлівасць вынікаў РДТ на аснове pHRP2 звязана з зменлівасцю антыгена-мішэні.
пЛДГ правіць
Лактатдэгідрагеназа P. falciparum (PfLDH) — гэта 33 кДа аксідарэдуктаза [EC 1.1.1.27]. Гэта апошні фермент гликолитического шляху, неабходны для генерацыі АТФ і адзін з найбольш распаўсюджаных ферментаў, экспрэсіраваных P. falciparum. ЛДГ плазмы (pLDH) з P. vivax, P. malariae і P. ovale) выяўляюць 90-92 % ідэнтычнасці з PfLDH з P. falciparum. Было заўважана, што ўзровень пЛДГ зніжаецца ў крыві раней за лячэнне, чым HRP2. У гэтым плане pLDH падобны на pGluDH. Тым не менш, кінетычныя ўласцівасці і адчувальнасць да інгібітараў, накіраваных на месца звязвання кофактора, істотна адрозніваюцца і вызначаюцца шляхам вымярэння канстант дысацыяцыі інгібітараў, якія адрозніваюцца да 21 разы.
pAldo правіць
Фруктоза-бісфасфат-альдалаза [EC 4.1.2.13] каталізуе ключавую рэакцыю ў працэсе гліколізу і вытворчасці энергіі і выпрацоўваецца ўсімі чатырма відамі. Альдолаза P.falciparum з’яўляецца бялком 41 кДа і мае 61-68 % падабенства паслядоўнасці з вядомымі эукарыятычнымі альдалазамі. Яго крыштальная структура была апублікаваная. Наяўнасць антыцелаў супраць р41 у сыроватках дарослых людзей, часткова неўспрымальных да малярыі, сведчыць аб тым, што р41 ўдзельнічае ў ахоўным імунным адказе супраць паразіта.
Зноскі
- ↑ Ling IT.; Cooksley S.; Bates PA.; Hempelmann E.; Wilson RJM. (1986). "Antibodies to the glutamate dehydrogenase of Plasmodium falciparum" (PDF). Parasitology. 92 (2): 313–324. doi:10.1017/S0031182000064088. PMID 3086819.
- ↑ Rodríguez-Acosta A, Domínguez NG, Aguilar I, Girón ME (1998). "Characterization of Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase-soluble antigen". Braz J Med Biol Res. 31 (9): 1149–1155. doi:10.1590/S0100-879X1998000900008. PMID 9876282.
- ↑ Li Y, Ning YS, Li L, Peng DD, Dong WQ, Li M (2005). "Preparation of a monoclonal antibodies against Plasmodium falciparum glutamate dehydrogenase and establishment of colloidal gold-immunochromatographic assay". Di Yi Jun Yi da Xue Xue Bao = Academic Journal of the First Medical College of PLA. 25 (4): 435–438. PMID 15837649.